免疫组化在病理诊断中的应用

1.包含IHC是什么?

2.什么是病理诊断?

3.免疫组化在病理诊断中的应用?

4.免疫组化在病理诊断中的局限性是什么?

1.包含IHC是什么?

免疫组化(IHC)是免疫学基本原理的应用——抗原-抗体反应，即抗体和抗原之间的结合具有高度特异性。首先，从组织或细胞中提取某种化学物质作为抗原或半抗原。然后通过免疫动物获得特异性抗体，抗体用于检测组织或细胞中类似的抗原物质。由于抗原和抗体的复合物是无色的，因此有必要通过组织化学方法(荧光素、酶、金属离子、同位素)显示抗原和抗体结合的部位，以实现对未知抗原的定性、局部或定量研究(图1)。

免疫组化标本以组织为主。这些组织来自病人或动物，并被冷冻或包在石蜡中。将这些组织制成厚度约为4 μm的切片，封合后进行加工。如果样本是一个细胞，它通常被称为免疫细胞化学(ICC)。对于ICC，大部分细胞外基质被去除，只留下整个细胞进行染色。ICC来源可以是来自患者或动物的细胞悬液(如血液涂片、拭子等)或实验室进行的组织培养细胞系。

2.什么是病理诊断?

病理诊断是研究疾病发生发展过程中的形态结构和功能代谢，为疾病的诊断、治疗和预防提供必要的理论和实践依据。病理诊断是对手术或尸检的肿瘤标本进行固定染色，然后在显微镜下进行组织学检查，以诊断疾病。这些样本更多来自活人。

尽管各种影像学技术发展迅速，但病理诊断仍然是各种肿瘤检查方法中最可靠的。病理诊断被称为“金标准”，是疾病的最终诊断。如果将病理诊断与生化免疫等检验诊断相比较，则病理诊断就像警方掌握的指纹、脚印、DNA等实际证据。因为它通过显微镜观察疑似病变组织的细胞形态和结构，可以直接看到组织发生了什么样的病理变化，可以对疾病做出更准确的判断，特别是在肿瘤性质的诊断上。

3.免疫组化在病理诊断中的应用?

目前，免疫组织化学技术在临床中的应用主要包括以下八个方面:

• 良恶性肿瘤的判断:免疫球蛋白(Ig)轻链抗体可用于检测B淋巴细胞增殖的单克隆或多克隆性质，以区分反应性增生或肿瘤性增生。
• 确定肿瘤的分期:肿瘤分期是判断预后的一个指标，与是否有浸润、淋巴或血管侵犯密切相关，IHC是检测这些变化的有效方法。
• 细胞性质判断:细胞的特异性抗原成分用特异性抗体标记，以确定细胞的特性和肿瘤的起源。
• 确定起源不明的转移性肿瘤的原发部位:对于来源不明的转移性肿瘤，免疫组化可以帮助确定恶性肿瘤的组织学来源和原发部位。例如，角蛋白抗体(CK20)在胃肠道癌、胆管癌、胰腺癌中呈阳性，但在肺癌、乳腺癌、肾癌中呈阴性。
• “未分化”恶性肿瘤的分类:未分化恶性肿瘤包括癌症或肉瘤。在HE切片上，由于肿瘤“未分化”，无法对肿瘤细胞的来源进行分类。在此基础上用非特异性抗体区分组织学类型，选择特异性抗体进行进一步鉴定。
• 进一步对不同器官和组织交界处的肿瘤进行分类:由于某些组织器官交界处的肿瘤具有重叠的特征，很难根据组织学基础进行分类。如组织交界处的肿瘤为睾丸胚胎癌和精原细胞瘤，两者很难区分，治疗和预后差异明显。但通过免疫组化检测角蛋白更容易鉴别:角蛋白阴性为精原细胞瘤，角蛋白阳性为睾丸胚胎癌。
• 及时、准确地检测微转移:在常规组织切片中，很难识别单个或多个转移性肿瘤细胞，淋巴结窦性组织细胞增多有时很难与某些癌症的早期转移性肿瘤区分开来。但是免疫组化可以帮助及时和准确地发现微小(癌症)转移。
• 传染病诊断:免疫组化具有针对病毒、细菌、真菌和寄生虫抗原的特异性抗体，可检测和诊断多种传染病的病原微生物，如乙肝病毒(HBV)、巨细胞病毒(CMV)、人乳头瘤病毒(HPV)、疱疹病毒(HSV)、丙肝病毒(HVC)、细小病毒(B19)、人禽流感病毒(AIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS)等。组织化学在传染病诊断中具有时效性、低风险、高敏感性、特异性和有效性的特点。

4.免疫组化在病理诊断中的局限性是什么?

然而，随着免疫组化技术的广泛应用，人们发现免疫组化技术存在一定的局限性。免疫组化在肿瘤诊断中的局限性主要是抗体特异性和解释。免疫组化手术中必须有阳性和阴性对照。免疫组化染色作为一项技术完整性质量控制，如果忽略对照组或不理想，应谨慎对待结果。

免疫组化的正确结果不仅依赖于技术步骤上的标准化操作，还依赖于正确的解释。在报告免疫组化染色结果时，不应孤立地加以解释。诊断和鉴别诊断，所用抗体的特性，以及所研究组织的性质都应加以考虑。同时要注意假阳性和假阴性结果的干扰。深入研究免疫组化的原理和技术，必须熟悉各种抗体的真阳性反应位点，实现实验室间免疫组化的标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥最大的辅助作用。

假阳性是阳性信号的不正确定位，包括着色不均、背景着色和边缘效果。此外，某些特定的组织成分也可能导致假阳性结果。免疫组化结果假阴性是指所有抗体标记切片均为阴性，无阳性信号。假阴性的结果不是真实的反应。

5.临床常用免疫组化指标的意义

众所周知，病理检查是临床诊断和治疗的金标准，对癌症患者尤其如此。免疫组化的结果对肿瘤的诊断、治疗和预后分析尤为重要。本文总结了当前的一系列检查及其意义。

恶性肿瘤Ki-67、p53的常规检查

目前的研究表明，大多数肿瘤的复发和转移取决于ki - 67而且p53价值，不取决于肿瘤组织的组织类型。如中分化腺癌，如果Ki-67和p53值超过50%，则预后较差。相比之下，如果肿瘤类型为低分化腺癌，Ki-67和p53值较低，则预后略好于中分化或高分化癌。

耐药预后标志物:P-gp、GSTπ、TOPOⅡ、Ki-67

p -糖蛋白(P-gp):它具有药物泵的作用，位于细胞膜和细胞质上。阳性率越高，对药物(阿霉素、柔红霉素、表柔红霉素、米托蒽醌、长春碱、长春新碱、紫杉醇、紫杉醇)的耐药性越强:

谷胱甘肽s -转移酶(GST π):它在排毒过程中起关键作用，主要位于细胞质上。阳性率越高，对药物(阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、肿瘤细胞)的耐药性越强。

拓扑异构酶II (TOPOⅡ):对药物起靶点作用，主要位于细胞核上。阳性率越高，说明下列药物越有效:蒽环类抗生素和鬼臼毒素，如VP-16、替尼泊苷、椭圆霉素、新霉素、柔红霉素、表柔红霉素、阿霉素、VM26。阳性率高的疫苗对VP-16尤其有效。

Ki-67是细胞增殖的标志，主要位于细胞核上。阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。

乳腺癌五项指标(ER、PR、C-erbB-2 (HER2)、Ki-67、p53)

乳腺癌耐药的预后标志物包括P-gp、GSTπ、TOPOⅡ、Ki-67、ER、PR和HER2．

雌激素受体(ER)主要作为一种性激素，位于细胞核上。阳性率越高，说明肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。

孕酮受体(PR)主要作为一种性激素，位于细胞核上。阳性率越高，说明肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。

C-erbB-2 (HER2)基因主要作为癌基因产物，位于细胞质上。阳性率越高，说明肿瘤恶性程度越高。

p53是一种肿瘤抑制基因，分为野生型(Wtp53)和突变型(Mtp53)。由于微免疫组化，Wtp53难以检测。Mtp53可通过免疫组化检测。突变后失去诱导细胞凋亡的能力。突变型p53高表达提示细胞增殖高，分化差，恶性程度高，预后差。

胃肠道间质瘤(GIST)诊断

95%的GIST具有特征性表达CD117．

依据典型的表达DOG1， DOG1阳性表达位点与CD117相似。注意，DOG1可以在一些cd117阴性的胃肠道间质瘤中表达(6%)。在胃间质瘤、上皮样间质瘤和PDGFRA突变的情况下，DOG1高表达。大多数要点表达CD34(70%),局部表达SMA(40%),s - 100(5%)，通常不表达肌间线蛋白(2%)。

世界卫生组织淋巴瘤的分类

最新的WHO亚型淋巴瘤有33种亚型，每种亚型的预后和治疗不同。淋巴瘤的诊断和分型极其困难，这是病理学上的难点。淋巴瘤诊断的免疫组化方案必须是“双包”，即每个组织必须标记两种以上的抗体。

b细胞淋巴瘤的诊断必须通过CD20而且CD79a阳性，也证实CD3阴性。因此，淋巴瘤的诊断需要大约8-10种抗体才能准确反映淋巴瘤的各种亚型。信息。