你生物学研究的好伙伴
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问:如何选择正确的抗体进行实验?CUSABIO是否提供多种应用的抗体?
问:在western blot分析中，推荐使用的抗体浓度是多少?
问:我在哪里可以得到你的抗体与其他物种的反应性?我应该如何确定抗体是否与其他种类有交叉反应?
问:能否提供WB、FC、IF、IP、ChIP、ELISA或IHC的方案?
问:为什么western blot (WB)中会出现额外的条带?
问:为什么在western blot (WB)中条带看起来弥漫和不规则?
问:为什么western blot (WB)的转移效率很低?
问:为什么在染色质免疫沉淀(ChIP)中存在大区域高背景低分辨率的现象?
问:你们提供什么产品或服务?
CUSABIO公司生产的多克隆抗体、单克隆抗体、标签/对照抗体、二抗、重组抗体、小分子抗体、ChIP级抗体和抗体对，应用于ELISA、WB、IHC/ICC、IF、IP/Co-IP、ChIP、FC和KO。我们还提供抗体定制服务,包括定制的重组抗体生产，定制单克隆抗体生产，定制多克隆抗体生产而且定制的改良抗体生产．
问:我们为什么要选择你们的抗体?
CUSABIO提供6万多种特异性抗体，大多数抗体可用于多种应用。此外，CUSABIO每年推出数以千计的新抗体产品。除了先进的实验设备外，CUSABIO抗体生产线还拥有专业的技术团队，成功搭建了多个技术平台。因此，我们有信心CUSABIO能够提供您想要的高质量抗体。
问:我在哪里可以找到使用过你们抗体的其他研究人员的参考资料?
我们的官方网站更新了使用CUSABIO抗体的研究人员的文章，请点击这里查看更多://www.gilabchnm.com/m-248.html．
问:CUSABIO如何确保抗体产品的质量?
在质量控制方面，我们通过严格的ELISA检测来验证抗血清和抗体的滴度，通过western blot或敲除试验来验证其特异性，我们的抗体具有更广泛的应用范围，是科研人员研究课题的有力工具。
问:CUSABIO如何批量生产单克隆抗体和多克隆抗体?
我们使用体内腹水生产单克隆抗体，和血清生产多克隆抗体。实际上，我们已经有了通过噬菌体展示技术筛选单克隆抗体的技术。
问:如何选择正确的抗体进行实验?CUSABIO是否提供多种应用的抗体?
你应该注意的规则如下:样本的种类，宿主抗体的种类，抗体的标记，推荐的稀释比例适用于感兴趣的应用。CUSABIO保证其抗体对应用有效，并与网站或产品数据表上列出的物种发生反应。如果您正在使用的应用程序，我们没有测试，我们将提供一个试验大小的样本，以评估抗体之前购买全尺寸。
问:单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别?
单克隆抗体是用相同的免疫细胞制造的，这些免疫细胞都是一个特定的亲本细胞的克隆。因此，它们对同一抗原和表位具有亲和力。多克隆抗体是用几种不同的免疫细胞制造的。它们对同一抗原有亲和力，但对不同的抗原表位有亲和力。单克隆抗体只能结合单个表位，而多克隆抗体可以结合同一蛋白上的不同表位。单克隆抗体比多克隆抗体具有更强的特异性和更少的背景噪声，因此一般更适合用于生化分析。然而，它们通常也更昂贵的生产，不那么强壮，对抗原的微小变化非常敏感。
问:一抗和二抗是什么关系?如何为我的实验选择合适的二抗?
一般情况下，一抗用于捕获目的蛋白，二抗可与一抗结合，用酶或染料标记，可扩增用于检测。我们建议你考虑以下因素:
a.视宿主种类而定。例如，如果一抗来自小鼠，那么二抗应该是抗小鼠的。
b.视一抗特性而定。
c.根据您的应用，如WB, IHC, ELISA等。
问:在western blot分析中，推荐使用的抗体浓度是多少?
一般建议在WB中使用CUSABIO抗体，稀释范围为1:500-1:2000。
问:ELISA分析中抗体的推荐浓度是多少?
ELISA的最佳稀释倍数应根据客户的检测平台和系统，通过实际实验确定。
问:我在哪里可以得到你的抗体与其他物种的反应性?我应该如何确定抗体是否与其他种类有交叉反应?
你可以用你的蛋白质序列来破坏免疫原序列。如果发现相似性大于或等于90%，则可以成功应用该抗体检测物种。但我们不能保证100%的成功。
问:能否提供WB、FC、IF、IP、ChIP、ELISA或IHC的方案?
请在以下网址下载协议//www.gilabchnm.com/m-239.html．另外，如果您在实验中找不到协议，我们可以通过电子邮件将协议发送给您。
问:在研制抗体时使用的免疫原是什么?你能列出抗体的免疫原序列吗?
我们使用多肽、天然蛋白和重组蛋白作为免疫原。免疫原序列请参考我们网站上的产品信息或产品数据表。如果您无法找到免疫原序列，请联系我们的技术支持索取此信息。
问:你确定抗原表位了吗?
抱歉，我们没有检查表位的位置，因为这不是很多研究的必要检查。你可以通过表位映射来识别表位。
问:你能告诉我每个抗体结合了多少生物素吗?
生物素与抗体的摩尔比为36.6:1。然而，很难确切地说每个抗体结合了多少生物素，因为标记是通过赖氨酸残基，而且还不清楚伯胺基团是如何连接到生物素上的。平均而言，每个IgG分子可以结合3-5个生物素分子。
问:这种多克隆抗体的IgG亚型是什么?
正常情况下，多克隆抗体在兔体内培养，兔体内只有一种IgG亚型。
问:请问FITC的峰值排放量是多少?
在水中，其最大吸收/发射波长为489 nm/515 nm，对应蓝色和绿色。
问:为什么实际能带比理论分子量大?
你可以计算抗体的分子量用库萨比奥分子量计算器．如果测试结果与理论分子量有较大差异。可能的原因如下:目标蛋白具有糖基化等多个修饰位点，或与体内其他蛋白形成稳定的复合物，或被切割或降解。
问:为什么我收到的这种抗体的体积小于瓶标签上的说明?
在运输和储存期间，小体积的抗体可能偶尔被困在产品小瓶的密封中。如果有必要，简要离心小瓶上的台式离心机，以排除任何液体在容器的盖子。
问:你能推荐抗体的同型控制吗?
同型对照用于确认一抗结合是特异性的，而不是非特异性Fc受体结合或其他蛋白相互作用的结果。同型对照抗体应与一抗的宿主种类、同型和结合物相匹配。例如，如果一抗是fitc标记的小鼠IgG1，那么您将需要选择fitc标记的小鼠IgG1同型对照。大多数同型对照为单克隆对照。多克隆抗体不适合，因为这些抗体包含一个以上的IgG亚类。
问:我能得到免费试用样品吗?
是的，CUSABIO将在2018年12月31日前免费提供数万种20 μg大小的抗体。这些抗体具有良好的特征，并在多种应用中得到验证，如ELISA, WB, IHC, IF, FC, IP, Co-IP, ChIP。点击这里了解更多关于抗体促进的知识。
问:这种抗体的纯度是多少?
CUSABIO提供的抗体纯度高于90%。
问:你们抗体的常见形式是什么?
液体的形式。
问:哪种缓冲液用于存储抗体?
我们使用0.01M PBS (pH 7.4)， 50%甘油。
问:抗体的浓度/体积是多少?
抗体的浓度/体积因批次而异。请告诉我们批号。
问:你经常使用哪些防腐剂?
我们使用0.03%的Proclin 300作为防腐剂。
问:抗体是否含有任何有害成分?
据我们所知，本产品中没有任何成分被归类为有害成分。
问:你们能提供什么样的抗体标签?
我们目前提供FITC, HRP，生物素在游离赖氨酸(lys)氨基上的随机标记。
问:你能发送你当前批次的COA/MSDS吗?
如果您需要，我们可以通过电子邮件将任何指定批次的COA/MSDS发给您。
Q:你们能提供1mg抗体的批量订单吗?
我们会在下单前检查我们的抗体库存。
问:抗体的分子量是多少?
一般来说，我们最常见的抗体类型是分子量约为150 kDa的IgG。
问:为什么有些抗体不再可用?
我们从库存中移除这些抗体，因为我们有新产品替代。
问:什么是特定抗体?
抗体(Ab)又称免疫球蛋白(Ig)，是一种y形蛋白，由免疫系统通过Fab可变区中和致病菌、病毒等病原体。
问:为什么western blot (WB)中没有条带?
a.抗体缺乏。一些抗体对靶蛋白的亲和力较差。你应该减少抗体稀释(比建议的开始稀释低2-4倍)。同时，抗体可能失去活性。你应该做个斑点分析。
b.缺乏蛋白质。你应该增加凝胶中蛋白质的总量。用另一种方法确认蛋白质的存在。使用阳性对照(重组蛋白、细胞系或处理细胞来表达感兴趣的分析物)。进行点印迹试验。
c。可怜的转移。在转移缓冲液中，PVDF/Immobilon-P膜应在甲醇或硝化纤维素膜中浸湿，以确保PVDF膜与凝胶之间的良好接触。
d。不完整的转移。你应该延长转移时间，因为一些高分子量的蛋白质可能需要更多的转移时间。
e。在转移。对于小分子量(小于10 kDa)的蛋白质，应降低转移电压或时间。
f.等电点大于9。应使用pH值较高的替代缓冲系统，如CAPS (pH 10.5)。
g.使用不正确的二抗。应确认宿主种类和一抗抗体类型，选择合适的二抗。
h.抗体不起作用。过期后请勿使用。
i.叠氮化钠污染。您应该确保缓冲液不包含叠氮化钠，因为它可以淬灭HRP信号。
j.一抗培养时间不足。应将孵育时间延长至4℃过夜。
问:为什么western blot (WB)中信号较弱?
a.低蛋白抗体结合。你应该尽量减少清洗次数。降低抗体溶液中的NaCl浓度或使用印迹缓冲液进行洗涤步骤(建议范围为0.15 M-0.5 M)。
b。抗体不足。你应该将抗体浓度提高到推荐浓度的2-4倍。
c。蛋白质不足。你应该增加凝胶中蛋白质的总量。
d。不活跃的接合。你应该在试管中混合酶和底物。如果颜色不显影或较弱，应制作新的试剂或购买新的试剂。切换到发射极耦合逻辑。
e。弱/老发射极耦合逻辑。你应该购买新的ECL试剂。
f.脱脂干奶可能会掩盖某些抗原。你应该减少阻塞牛奶的百分比或用3%的牛血清白蛋白代替。
问:为什么western blot (WB)中会出现额外的条带?
a.一抗非特异性结合。你应该增加一抗稀释因子。减少凝胶上的总蛋白质含量。使用单特异性或抗原亲和纯化抗体。
b.二抗非特异性结合。应单独使用二抗进行控制(省略一抗)。如果出现条带，则选择另一种二抗，使用单特异性或抗原亲和纯化抗体。
c.分析物的降解。应尽量减少样品的冷冻/解冻周期，在储存前添加蛋白酶抑制剂或制作新鲜样品。
d.分析物的聚集。应增加DTT量，以确保减少二硫键(20-100 mM DTT)。用沸水加热5-10分钟，然后装入凝胶中。进行短时间离心。
e.试剂污染。应检查缓冲液是否被污染，或交替制作新的试剂。
问:western blot中涂片的原因是什么?
a.一抗非特异性结合。应在5%的牛奶中以较低浓度稀释单特异性抗体或抗原亲和纯化抗体，或调整脱脂牛奶(2-5%)或NaCl (0.15-0.5 M)浓度作为一抗溶液。
b.二抗非特异性结合。应单独使用二抗进行控制(省略一抗)。如果膜上出现一些条带，应稀释抗体或交替更换另一种二抗。
c。阻止不足。你应该从5%的脱脂干牛奶开始，0.1%-0.5% Tween 20, 0.15-0.5 M NaCl，在25 mM Tris (pH 7.4)中。潜伏期可以延长。可根据需要上下调整牛奶浓度。在4℃下过夜阻塞可能会降低阻塞效率，因为洗涤剂在较低的温度下可能无效。
d。洗不足。应增加洗涤缓冲液中吐温20的浓度(0.1%-0.5%)或增加洗涤次数。
e.脱脂干奶可能含有目标抗原或内源性生物素，与亲和素/链霉亲和素不相容。你应该用3%的牛血清白蛋白代替。
f.一些IgY抗体可以识别牛奶蛋白。你应该用3%的牛血清白蛋白代替。
g。电影曝光过度。你应该减少暴露时间。如果目标信号太强，请多等5-10分钟再重新曝光。
问:为什么在western blot (WB)中条带看起来弥漫和不规则?
一个坏的胶凝。在填充之前，你应该充分混合溶液。
b.有些样品的盐浓度较高。你应该淡化或调整样品的盐浓度。
c.每孔样品体积不一致。你应该调整样品体积，使其基本相同。
d.缓冲不起作用。你应该购买一个新的缓冲器或制作新的缓冲器。
e.气泡被困在膜中。你应该轻轻去除任何气泡，特别是在转移过程中。
f.电泳温度过高。你应该降低电流或电压。
问:为什么western blot (WB)的转移效率很低?
a. PH接近等电点。你应该增加转移缓冲液的pH值。
b.气泡被膜困住。你应该轻轻地去掉所有的气泡。特别是在转移。
c.滤纸接触。滤纸、转印膜、凝胶的尺寸要基本相同，避免滤纸直接接触。
d.转印膜选择不当。应使用可靠的PVDF薄膜或硝基纤维素薄膜。
e.电压或电流过低。我们建议在湿转移过程中20 mA恒流，半干转移前后25 V恒压。
f.转接时间过长或过短。应根据蛋白质的大小和使用电泳的转移装置来选择合适的转移时间。
g.湿转移时环境温度过高。应使用预冷的传输缓冲液或将机组设置为4℃。
问:为什么免疫组化(IHC)染色缺乏?
a.缺乏抗原。我们建议通过原位杂交来检测蛋白表达，因为在一些罕见的情况下，即使检测到mRNA，蛋白翻译也可能被阻断。
b.抗原在与一抗孵育前被破坏。如果在加入一抗之前先淬灭内源性过氧化物酶，则应在与一抗孵育后阻断过氧化物酶。
c.抗原提取无效。应增加治疗时间或更换治疗液。
d.抗体因储存不当而不起作用。您应该按照说明书上的存储说明操作。一般情况下，将抗体分离到足够的小体积，以形成一次实验的有效溶液。请避免反复冻融循环。
e.未激活的一抗或二抗。你们应该独立地测试报告系统来评估试剂的可行性。
f.二抗和一抗不相容。你应该使用与第一抗体相互作用的第二抗体。例如，如果在兔身上培养一抗，就使用抗兔二抗。
g.组织固定不充分。你应该尝试增加固定时间或尝试不同的固定剂。
overfixation h。组织。你应该减少浸泡或固定后步骤的持续时间。如果不能避免浸泡固定，抗原可以通过抗原检索试剂治疗来揭开。
i.表位在固定或包埋过程中改变。你应该尝试通过各种抗原检索技术来恢复免疫反应性。
j.试剂遗漏或使用顺序错误。您应该重复染色并确认正确的试剂按正确的顺序使用。
问:为什么免疫组化(IHC)染色不合适?
a.固定法不适用于抗原。你应该尝试不同的固定剂或增加固定时间。
b.抗原提取可能对该抗原或组织不合适。你应该尝试不同的抗原提取条件。
c.抗原的静电荷改变。你应该尝试调整抗体稀释剂的pH值或阳离子浓度。
d.固定延迟引起抗原扩散。你应该迅速修复组织，并尝试交联固定剂而不是有机(酒精)固定剂。
问:为什么背景在免疫组化(IHC)中很重要?
a.一抗和或二抗浓度高。你应该滴度抗体，以确定促进一抗和二抗特定反应所需的最佳浓度。
b.初级或次级试剂与组织的非特异性结合。在一抗孵育前应使用阻断步骤。脱脂干牛奶是另一种选择。
c.二抗非特异性结合。你应该使用去除交叉反应的IgG抗体(对样品进行吸收)。
d.抗体和蛋白质在组织中的疏水相互作用。你应该降低抗体稀释剂的离子强度。
e.离子相互作用的背景。你应该增加稀释缓冲液的离子强度。
f.纸巾干了。在染色过程中应避免让组织干燥。
试剂粘在旧的或准备不良的载玻片上。你应该重新准备新准备的或购买的幻灯片。
问:为什么免疫组化(IHC)会破坏组织或细胞形态?
a.抗原提取方法过于苛刻。你应该根据经验确定在恢复抗原免疫反应的同时保存组织形态的条件。
b.组织切片脱落。你应该增加固定时间。根据经验确定一个额外的或替代的固定剂。使用刚准备好的、充好电的玻片。
c.染色过程中固定不足对组织或细胞造成物理损伤。你应该增加固定时间和/或增加一个固定后步骤。增加固定液/组织比例。切割更小的组织片以更彻底的浸泡固定。
d.组织自溶导致坏死碎片染色。应增加固定时间、比例。考虑使用交联固定剂。
e.组织切片出现撕裂或折叠。你应该去掉部分下面的气泡。使用锋利的刀片重新切割部分，或者在分析结果时忽略损坏的区域。
f.组织形态分辨率差。你应该切更薄的组织切片，因为冰晶可能会破坏冰冻切片的形态。
问:为什么免疫沉淀(IP)中有太多的抗体洗脱?
在进行IP测试前，应将抗体与珠粒混合，使用温和的甘氨酸缓冲液梯度洗脱，这将显著减少抗体的数量。
问:为什么免疫沉淀(IP)的背景如此之高?
a.抗体非特异性结合过多。你应该用少量的纯化抗体。
b.裂解液中细胞过多/蛋白过多，导致洗脱液中非特异性蛋白较多。减少细胞/裂解液的使用数量(10-500µg)。
c.携带不溶于洗涤剂的蛋白质。离心后立即清除上清液。这样就会在颗粒中留下不溶性蛋白质。如果再悬浮，再次离心。
d.准备珠子太少。你应该确保BSA是新鲜的，并在PBS中与1%的BSA孵育1小时。使用前用PBS冲洗3-4次。
e。不完整的洗涤。你应该在相关的阶段彻底清洗，在离心前将试管盖上盖子并倒转几次。
f.免疫沉淀过程中抗原降解。裂解前应添加新鲜蛋白酶抑制剂。
问:为什么在染色质免疫沉淀(ChIP)中存在大区域高背景低分辨率的现象?
您应该优化DNA片段(不大于1.5 kb)。
问:为什么在染色质免疫沉淀(ChIP)中没有样品的DNA扩增?
选择阳性对照模板DNA，以确认引物正常工作。
问:为什么流式细胞术(FC)是高背景?
a.增益设置过高。您应该降低增益以降低信号，并使用阳性对照重新正确设置流式细胞仪。
b.抗体过多。你应该降低抗体浓度。
问:为什么在流式细胞术(FC)中观察到两个或两个以上的细胞群?
a.表达靶蛋白的细胞群不止一个。你应该检查是否有足够的细胞分离。
b.细胞双重性存在。双偶细胞将显示为第二个细胞群，其荧光强度约为图上的两倍。在染色前和在流式细胞仪上运行前，应使用移液管轻轻地混合细胞。
问:我下订单后多久可以拿到产品?
我们的大多数抗体都有库存，通常我们有至少2个工作日的交货时间。如果您急需该抗体，请联系我们的技术支持。
定制服务如重组抗体生产、单克隆抗体生产、多克隆抗体生产和修饰抗体生产，分别需要8-16周、18-24周、12-16周和12-14周才能出货。
问:抗体服务的可交付成果是什么?
重组抗体生产:
抗原QC报告;100 μg纯化重组抗体，附QC报告，包括基因测序、浓度、纯度、内毒素含量等信息;WB抗原阳性保证;其他应用(IHC, IF, IP, FC, ChIP)可根据客户要求提供。
单克隆抗体生产:
抗原QC报告;100μL腹水;A/G蛋白纯化单克隆抗体1-2 mg;ELISA效价保证1:10000;WB抗原阳性保证;杂交瘤验证报告;其他应用(IHC, IF, IP, FC)可根据客户要求提供。
多克隆抗体生产:
抗原QC报告;ELISA效价保证1:64000;WB抗原阳性保证;预免疫血清1 mL，抗血清2 mL, A/G蛋白纯化抗体5 ~ 10 mg;SDS-PAGE检测，抗体纯度保证90%。
修改后的抗体生产:
抗原HPLC报告;ELISA效价保证1:10000;WB抗原阳性保证;预免疫血清1 mL，抗血清2 mL，抗原亲和纯化抗体1 mg。
问:什么是送货方式?
默认的交付形式是液体形式。如果您有冻干产品的需求，请在下订单时备注此要求。
问:抗体是如何包装的?是玻璃瓶、塑料瓶还是其他容器?
通常抗体装在塑料瓶中，用一个小塑料套防止塑料瓶损坏。
问:我应该如何储存和分离抗体?
这种抗体在室温下只能稳定几天。交货时请将抗体分装-20℃保存。请避免反复冻融，以便根据您实验中使用的量分离抗体，但每次分离不应小于10 μL。每种组分的用量越少，由于液体蒸发和容器吸附对抗体浓度的影响越大。
问:抗体的保质期是多久?
抗体的保质期受贮存状态、贮存温度、缓冲成分等影响。一般来说，我们的抗体的保质期从生产日期起至少为12个月。
